بروسلوزBrucellosis و تست های تشخیصی آن
بروسلوز یك بیماری عفونی است كه توسط سویه های مختلف بروسل در گاو ، خوك ، گوسفند ، بز ، اسب ، سگ و انسان بروز پیدا می كند. انسان از طریق مصرف شیر و لبنیات آلوده و گوشت و فرآورده های آن به بیماری مبتلا میگردد كه بیماری در انسان با درد شدید در ناحیه مفاصل ، تعرق بیش از حد ، تورم مفاصل و ... همراه میباشد. به علت خطرناك بودن بیماری برای انسان و همچنین قابلیت انتقال بیماری از دام به انسان جمعیت دامی كشور را تست كرده و موارد مثبت را كشتار میكنند . به منظور تست حیوان از نظر بیماری بروسلوز از آزمایشات سرولوژیكی همچون رزبنگال و رایت استفاده میشود.
آزمون های تشخیصی بروسلوز :
1.تست رزبنگال :
اساس تست رز بنگال آگلوتیناسیون مستقیم میباشد .
به منظور انجام تست رزبنگال ابتدا 50 میکرو لیتر سرم دام مشکوک به بروسلوز را به یکی از چاهک های پلیت ریخته و یک قطره انتی ژن رزبنگال ( صورتی رنگ ) را به ان اضافه می کنیم و سپس با اپیکاتور به صورت دایره وار مخلوط کرده و بعد در دستگاه شیکر shaker گذاشته تا به مدت 5 دقیقه کاملا مخلوط شود. در صورتیكه آنتی بادی ضد بروسلا در داخل سرم حیوان وجود داشته باشد با آنتی ژن رزبنگال واكنش داده و به صورت clumping نمودار خواهد شد که با چشم غیر مسلح قابل مشاهده است . و در صورت مشاهده آگلوتیناسون تست مثبت اعلام شده و دام باید كشتار گردد. این تست یك تست كیفی میباشد كه فقط وجود یا عدم وجود بیماری را نشان میدهد.
2.تست رایت :
آزمون رایت بر اساس آگلوتیناسیون مستقیم است.آزمون رایت به دو روش اسلایدی و روش لوله ای انجام می شود.
الف:تست رایت به روش اسلایدی
ابتدا با یک پیپت 0.1 میلی لیتری بر روی یک اسلاید مناسب به ترتیب مقادیر 0.08و 0.04, 0.02, 0.01, 0.005,میلی لیتر از سرم بیمار را می ریزیم . از یک نمونه سرم مثبت و یک نمونه سرم منفی برای کنترول آگلوتیناسیون استفاده می کنیم . با استفاده از سمپلر 30 میكرولیتری آنتی ژن را به سرم موجود در چاهك ها اضافه كرده و پس از اضافه كردن آنتی ژن با استفاده از اپلیكاتور سرم و آنتی ژن را به صورت دورانی به هم مخلوط میكنیم . اسلاید را بر روی روتاتور قرار داده و بعد از گذشت 3 دقیقه نتایج را در زیر نور غیر مستقیم قرائت میكنیم .
هر یك از چاهك ها نشان دهنده یك تیتر خاصی میباشد كه به حجم سرم وابسته است .به این صورت كه حجم 0.08 تیتر 20/1 ، حجم 0.04 تیتر 40/1 ، حجم 0.02 تیتر 80/1 ، حجم 0.01 تیتر 160/1 و حجم 0.005 تیتر 320/1 را نشان میدهد .
با استفاده از روش اسلاید میتوان بیمار یا عدم بیماری را تشخیص داد كه در صورت مثبت شدن حتما باید تیتر دقیق سرم را با استفاده از روش لوله ای تعیین كرد.
ب:تست رایت به روش لوله ای
به منظور انجام آزمایش رایت لوله ای ابتدا 11 عدد لوله آزمایش را در جا لوله ای قرار داده و در لوله اول 0.9 میلی لیتر و در لوله های بعدی 0.5 میلی لیتر سرم فیزیولوژی ریخته میشود . در مرحله بعد 0.1 میلی لیتر از سرم گرفته شده از خون حیوان را در لوله اول ریخته و خوب مخلوط میكنیم سپس از لوله اول 0.5 میلی لیتر برداشته و در لوله دوم میریزیم و بعد از مخلوط كردن 0.5 میلی لیتر از لوله دوم برداشته و به لوله سوم میریزیم و این كار را تا لوله دهم ادامه داده و 0.5 میلی لیتر لوله دهم را دور میریزیم . لوله یازدهم به عنوان كنترل آنتی ژن بوده و فاقد سرم میباشد. در مرحله بعد به تمام لوله ها 0.5 میلی لیتر آنتی ژن اضافه میكنیم . و پس از مخلوط كردن لوله ها را با دور 2500 به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ میكنیم و نتایج آگلوتیناسیون را در لوله ها بررسی میكنیم كه لوله اول تیتر 20/1 لوله دوم تیتر 40/1 لوله سوم تیتر 80/1 لوله چهارم تیتر 160/1 لوله پنجم تیتر 320/1 لوله ششم تیتر 640/1 لوله هفتم تیتر 1280/1 و ... را نشان میدهند.
در صورت مثبت بودن آلودگی دام به بروسلوز در گاو اندامهای آلوده را باید ضبط كرد و در مورد گوسفند و بز ابتدا آزمایشات میكروبی انجام داده و بعد تصمیم می گیریم . اگر میكروب در لاشه موجود بود لاشه باید حذف شود.
